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乙酸纤维素薄膜

简要描述:血清蛋白乙酸纤维薄膜薄膜
一、实验目的
学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理。
二、实验原理
电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离 影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的pH值、溶液的

  • 所在城市:潍坊市
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2022-01-25
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产品介绍

血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳生物化学实验

一、实验目的

学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理

二、实验原理

电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离 影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象 影响电泳迁移率的内在因素:质点所带净电荷的量、质点的大小和形状 采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高,对样品无拖尾和吸附现象等优点 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 μm,有很强的通透性,对分子移动阻力很小

三、实验仪器

1DYY-8C型常压电泳仪:北京六一仪器厂生产,1/2

2.醋酸纤维薄膜(2 cm×8cm):2/人。

3.培养皿:一排桌子(即4组)公用5套,包括平衡、染色各用一套,漂洗用3套。

4.点样器:一个/组。

5.滤纸:公用。

6.玻璃板:一块/组。

7.镊子:一个/组。

8.玻棒:公用。

四、实验试剂

1.BBT缓冲液(pH8.6,离子强度0.07):BBT2.76g,BBTN15.45g,用蒸馏水定容至1000mL

2.染色液:氨基黑10B 0.25g,用甲醇50mL、冰醋酸10mL、水40mL溶解(可重复使用)。

3.漂洗液:甲醇或乙醇45mL,冰醋酸5mL,水50mL,混匀。

4.人或动物血清:从医院或自制,冰冻保存,现取现用

五、实验过程

浸泡:将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。将粗糙面朝上置于盛有缓冲液的平皿中,浸泡20min方可用于点样

点样:用镊子取出浸透的薄膜,夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液,然后平铺在玻璃板上(无光泽面朝上)。在另一载玻片上滴一滴血清,点样器(用盖玻片的一边)在血清上蘸一下(可来回移动一次),再将点样器轻印在加样线上,使血清渗透到薄膜内,形成均匀的直线

五、实验过程

电泳槽的准备:根据电泳槽膜支架的宽度,裁剪尺寸合适的滤纸条。在两个电极槽中,各倒入等体积的电泳缓冲液,在电泳槽的两个膜支架,各放两层滤纸条,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电泳缓冲液中。当滤纸全部润湿后,用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡,使滤纸的一端能紧贴在膜支架上,即为滤纸桥

电泳:将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上(点样面朝下),另一端平贴在阳极支架上。盖上电泳槽盖,使薄膜平衡10 min。通电,调节电压至160 V,电流强度为0.40.6 mA/cm膜宽度,电泳时间约25 min

染色:电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5 min

漂洗:将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次,直至背景蓝色脱尽,条带清晰为止,可得到色带清晰的电泳图谱

六、注意事项

保持薄膜清洁,务必戴上塑料手套,勿用手指接触薄膜表面,以免油污或污物沾上,影响电泳结果。注意醋酸纤维膜的质量,至少浸泡10分钟,浸泡很久仍有大块白色硬点者须弃之不用。加样时一定要呈直线、垂直、分布均匀,这样泳动的区带整齐、不歪。以免影响蛋白质区带图谱。电泳槽两边的缓冲液应保持液面在同一水平面上,槽里的缓冲液要保持清洁。电泳电压大小,时间长短与缓冲液的离子强度都有一定的关系。一般电流约0.4—0.6mA/cm,电压110—160V 。

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