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液相色谱仪常见的问题及解决方法分享

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   液相色谱仪常见的问题及解决方法分享
  液相色谱仪法是在经典色谱法的基础上引用了气相色谱的理论。在技术上,流动相改为高压输送;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时,柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。
  只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此,不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400以上)的有机物(些物质几乎占有机物总数的75%-80%)原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计,在已知化合物中能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70-80%。
  液相色谱仪的常见问题及解决方法介绍:
  (一)保留时间变化
  1.柱温变化:柱恒温,必要时需配置恒温箱
  2.等度与梯度间未能充分平衡:至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
  3.缓冲液容量不够:用》25mmol/L的缓冲液
  4.柱污染:每天冲洗柱
  5.柱内条件变化:稳定进样条件,调节流动相
  6.柱快达到寿命:采用保护柱
  (二)保留时间缩短
  1.流速增加:检查泵,重新设定流速
  2.样品超载:降低样品量
  3.键合相流失:流动相pH值保持在3~7.5检查柱的方向
  4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀
  5.温度增加:柱恒温
  (三)鬼峰
  1.进样阀残余峰:每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
  2.样品中未知物:处理样品
  3.柱未平衡:重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)
  4.三弗乙酸(TFA)氧化(肽谱) :每天新配,用抗氧化剂
  5.水污染(反相) :通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水
  (四) 基线噪声
  1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气:加柱后背压
  2.污染(随机噪声) :清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂
  3.检测器灯连续噪声:更换氘灯
  4.电干扰(偶然噪声) :采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)
  5.检测器中有气泡:流动相脱气,加柱后背压
好了,以上便是关于液相色谱仪的相关内容介绍了。

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